Phương pháp phát hiện khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được quy định thế nào?

Nội dung chính

• Phương pháp phát hiện khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được quy định thế nào?
• Việc định lượng khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được thực hiện theo phương pháp nào?
• Thiết bị và dụng cụ thủy tinh dùng để tiến hành lấy mẫu được quy định ra sao?

Phương pháp phát hiện khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được quy định thế nào?

Phương pháp phát hiện khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được quy định tại tiểu mục 4.1 Mục 4 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6846:2007 (ISO 7251:2005) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện và định lượng Escherichia coli giả định - Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất như sau:

4. Nguyên tắc

4.1. Phương pháp phát hiện

4.1.1. Cấy một lượng qui định huyền phù ban đầu của mẫu thử vào môi trường tăng sinh lỏng chọn lọc.

4.1.2. Ủ ống nghiệm ở 37 oC đến 48 giờ. Sau 24 giờ và 48 giờ kiểm tra ống về sự sinh khí.

4.1.3. Nếu thấy ống nghiệm mờ, đục, hoặc sinh khí thì cần cấy truyền sang ống nghiệm có chứa môi trường lỏng chọn lọc (canh thang EC).

4.1.4. Ủ ống nghiệm thu được trong 4.1.3 ở 44 oC đến 48 giờ. Sau 24 giờ và 48 giờ, kiểm tra các ống về sự sinh khí.

4.1.5. Nếu ống nghiệm thu được trong 4.1.4 cho thấy sinh khí thì cần cấy truyền sang ống nghiệm có chứa nước pepton không chứa indol.

4.1.6. Ủ ống nghiệm thu được trong 4.1.5 ở 44 oC trong 48 giờ. Kiểm tra ống nghiệm về sự sinh indol do sự phân hủy của tryptophan trong pepton.

4.1.7. Các ống nghiệm cho thấy mờ đục, hoặc sinh khí trong môi trường tăng sinh lỏng (4.1.1) và khi được cấy truyền có sinh khí trong canh thang EC và sinh indol trong nước pepton ở 44 oC được coi là các ống có chứa E.coli giả định. Các kết quả được chỉ rõ là “có mặt” hoặc "không có mặt“ E.coli giả định trong x g hoặc x ml sản phẩm.

...

Theo đó, phương pháp phát hiện khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được thực hiện như tại quy định trên.

Phương pháp phát hiện khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được quy định thế nào? (hình từ internet)

Việc định lượng khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được thực hiện theo phương pháp nào?

Phương pháp định lượng khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi được quy định tại 4.2 Mục 4 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6846:2007 (ISO 7251:2005) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện và định lượng Escherichia coli giả định - Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất như sau:

4.2. Phương pháp định lượng

4.2.1. Cấy một lượng qui định huyền phù ban đầu vào ba ống nghiệm đựng môi trường tăng sinh lỏng chọn lọc nồng độ kép.

4.2.2. Cấy một lượng qui định huyền phù ban đầu vào ba ống nghiệm đựng môi trường tăng sinh lỏng chọn lọc nồng độ đơn.

Sau đó, trong cùng điều kiện, cấy một lượng qui định của các dung dịch pha loãng thập phân của huyền phù ban đầu vào ba ống nghiệm khác đựng môi trường nồng độ đơn.

4.2.3. Ủ ấm các ống môi trường nồng độ đơn và nồng độ kép ở 37 oC đến 48 giờ. Sau 24 giờ đến 48 giờ kiểm tra các ống nghiệm về sự sinh khí.

4.2.4. Từ mỗi ống môi trường nồng độ kép cho thấy mờ, đục hoặc sinh khí, từ mỗi ống đựng môi trường nồng độ đơn cho thấy sinh khí, được cấy truyền vào ống nghiệm đựng môi trường lỏng chọn lọc (canh thang EC).

4.2.5. Ủ các ống thu được trong 4.2.4 ở 44 oC trong 48 giờ. Sau 24 giờ đến 48 giờ, kiểm tra các ống nghiệm về sự sinh khí.

4.2.6. Mỗi ống nghiệm thu được trong 4.2.5 cho thấy sinh khí được cấy truyền sang ống nghiệm chứa nước pepton không chứa indol.

4.2.7. Ủ các ống thu được trong 4.2.6 ở 44 oC đến 48 giờ. Kiểm tra các ống nghiệm về sự sinh indol do sự phân huỷ của tryptophan trong pepton.

4.2.8. Xác định số có xác suất lớn nhất của E.coli giả định theo bảng MPN (xem phụ lục A) ứng với số lượng ống đựng môi trường nồng độ đơn và nồng độ kép và sau khi cấy truyền có sinh khí trong môi trường (EC) và sinh indol trong nước pepton ở 44 oC.

Như vậy, việc định lượng khuẩn Ecoli giả định trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi theo tiêu chuẩn được thực hiện theo phương pháp định lượng.

Thiết bị và dụng cụ thủy tinh dùng để tiến hành lấy mẫu được quy định ra sao?

Thiết bị và dụng cụ thủy tinh dùng để tiến hành lấy mẫu được quy định tại Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6846:2007 (ISO 7251:2005) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện và định lượng Escherichia coli giả định - Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất như sau:

(1) Thiết bị để khử trùng khô (tủ sấy) hoặc để khử trùng ướt (nồi hấp áp lực)

Xem Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6404:2016 (ISO 7218:2007 with amendment 1:2013) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Yêu cầu chung và hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật

- Tủ ấm, có khả năng hoạt động ở 37 oC ± 1 oC và 44 oC ± 1 oC.

- Nồi cách thủy, có khả năng duy trì ở 44 oC ± 1 oC.

- Các ống nghiệm, có kích thước khoảng 16 mm x 160 mm, 18 mm x 180 mm và 20 mm x 200 mm.

- Que cấy vòng, bằng platin/iridi hoặc niken/crom có đường kính khoảng 3 mm hoặc các vòng lấy mẫu 10 vô trùng sử dụng một lần.

- Các ống Durham, có kích thước thích hợp dùng cho các ống nghiệm (6.4).

- Pipet xả hết, có dung tích danh định 1 ml và 10 ml.

- pH met, chính xác đến ± 0,1 đơn vị pH ở 25 oC và có thể đọc đến 0,01 đơn vị pH.