Khi thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường nước cần tuân thủ những nguyên tắc nào?

Nội dung chính

• Phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform không thể áp dụng cho mẫu nước gì?
• Khi thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường nước cần tuân thủ những nguyên tắc nào?
• Thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường nước cần những thiết bị, dụng cụ nào?

Phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform không thể áp dụng cho mẫu nước gì?

Phạm vi áp dụng cho phương pháp định lượng Escherichia coli và vi khuẩn coliform được quy định tại Mục 1 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6187-1:2019 (ISO 9308-1:2014) về Chất lượng nước - Phát hiện và đếm Escherichia coli và vi khuẩn Coliform - Phần 1: Phương pháp lọc màng áp dụng cho nước có số lượng vi khuẩn thấp như sau:

Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp định lượng Escherichia coli (E. coli) và vi khuẩn coliform. Phương pháp này sử dụng kỹ thuật lọc màng, sau đó nuôi cấy trên môi trường thạch coliform sinh màu và tính toán số lượng vi sinh vật đích có trong mẫu thử. Vì môi trường thạch phân biệt có độ chọn lọc thấp nên hệ vi sinh vật nền có thể phát triển gây nhiễm cho số đếm E. coli và vi khuẩn coliform, ví dụ: phương pháp này không thích hợp để áp dụng với mẫu nước bề mặt hoặc nước giếng nông.

Tiêu chuẩn này đặc biệt thích hợp cho những loại nước có số lượng tổng vi khuẩn dưới 100 khuẩn lạc trên môi trường thạch coliform sinh màu (CCA) bao gồm nước uống đóng chai, nước bể bơi khử khuẩn hoặc nước đã qua xử lý làm nước uống.

Một vài chủng E. coli âm tính với β-D-glucuronidase, như Escherichia coli O157, sẽ không phát hiện được là E. coli. Vì chúng có enzym β-D-galactosidase dương tính nên sẽ giống như vi khuẩn coliform trên môi trường CCA.

Theo tiêu chuẩn vừa nêu thì phương pháp lọc màn không thích hợp để áp dụng với mẫu nước bề mặt hoặc nước giếng nông vì môi trường thạch phân biệt có độ chọn lọc thấp nên hệ vi sinh vật nền có thể phát triển gây nhiễm cho số đếm Escherichia coli và vi khuẩn coliform.

Phương pháp lọc màn chỉ thích hợp để áp dụng cho những loại nước có số lượng tổng vi khuẩn dưới 100 khuẩn lạc trên môi trường thạch coliform sinh màu (CCA) bao gồm nước uống đóng chai, nước bể bơi khử khuẩn hoặc nước đã qua xử lý làm nước uống.

Khi thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường nước cần tuân thủ những nguyên tắc nào? (Hình từ Internet)

Khi thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường nước cần tuân thủ những nguyên tắc nào?

Các nguyên tắc cần tuân thủ khi thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform gồm các nguyên tắc quy định tại Mục 4 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6187-1:2019 (ISO 9308-1:2014) về Chất lượng nước - Phát hiện và đếm Escherichia coli và vi khuẩn Coliform - Phần 1: Phương pháp lọc màng áp dụng cho nước có số lượng vi khuẩn thấp như sau:

- Lọc phần mẫu thử qua màng để giữ lại các vi sinh vật, sau đó đặt màng lọc lên đĩa thạch coliform sinh màu.

- Ủ đĩa thạch đã đặt màng lọc ở (36 ± 2) °C trong (21 ± 3) h.

- Đếm các khuẩn lạc coliform dương tính β-D-galactosidase (màu hồng đến đỏ) được giả định là vi khuẩn coliform. Để tránh kết quả dương tính giả do các vi khuẩn có oxidase dương tính như Aeromonas spp, các khuẩn lạc giả định coliform này cần được khẳng định âm tính oxidase.

- Các khuẩn lạc dương tính β-D-galactosidase và β-D-glucuronidase (màu xanh đen đến màu tím) được đếm là E. coli.

- Tổng số vi khuẩn coliform là tổng của các khuẩn lạc âm tính oxidase có màu hồng đến màu đỏ và tất cả các khuẩn lạc có màu xanh đậm đến màu tím.

Thực hiện phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường nước cần những thiết bị, dụng cụ nào?

Khi tiến hành phương pháp lọc màng dùng để phát hiện Escherichia coli và vi khuẩn Coliform trong môi trường tại phòng thí nghiệm cần sử dụng các thiết bị, dụng cụ theo quy định tại Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6187-1:2019 (ISO 9308-1:2014) về Chất lượng nước - Phát hiện và đếm Escherichia coli và vi khuẩn Coliform - Phần 1: Phương pháp lọc màng áp dụng cho nước có số lượng vi khuẩn thấp như sau:

(1) Thiết bị tiệt trùng bằng hơi nước (nồi hấp), theo hướng dẫn của TCVN 9716 (ISO 8199).

(2) Tủ ấm, có thể điều chỉnh được nhiệt độ (36 ± 2) °C

(3) Máy đo pH, với độ chính xác ± 0,1 ở 20 °C và 25 °C

(4) Thiết bị lọc màng

(5) Màng lọc, làm bằng este xenlulô hoặc vật liệu tương đương khác, đường kính khoảng 47 mm hoặc 50 mm, đường kính lỗ lọc 0,45 μm, ưu tiên loại có kẻ ô vuông.

Màng lọc không được có yếu tố ức chế hoặc kích thích sự phát triển của vi khuẩn và mực in ô vuông không được ảnh hưởng đến sự phát triển của vi khuẩn.

Nếu màng lọc chưa được tiệt trùng thì cần tiệt trùng theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Mỗi lô màng cần được thử theo ISO 7704 về tính thích hợp cho thử nghiệm, đặc biệt khi sử dụng các loại màng lọc khác nhau có thể cho kết quả khác nhau về độ thu hồi và sự hiện màu.

(6) Kẹp khử trùng, dùng để kẹp màng lọc.